禽呼腸孤抗體檢測(cè)-elisa酶聯(lián)免疫試劑盒使用說(shuō)明書
【用途】
用來(lái)檢測(cè)雞血清中的禽呼腸孤病毒抗體
【試驗(yàn)原理】
禽呼腸孤病毒被認(rèn)為與病毒性關(guān)節(jié)炎、發(fā)育遲緩綜合征、呼吸系統(tǒng)疾病、腸熱病、吸收障礙綜合癥和骨質(zhì)疏松有關(guān),從未發(fā)病的雞中也可分離到呼腸孤病毒,根據(jù)宿主日齡、毒力和接觸病毒途徑的不同,病毒誘發(fā)疾病的的性質(zhì)、癥狀和嚴(yán)重程度也不同,雞血清中的禽呼腸孤病毒抗體水平及整個(gè)雞群的免疫狀況可用方法進(jìn)行監(jiān)測(cè)。
將滅活的抗原包被在微孔板上,加入稀釋后的血清并孵育。血清中的所有抗REO抗體將與微孔板上的REO抗原結(jié)合并形成REO抗原抗體復(fù)合物,然后洗掉未結(jié)合的物質(zhì),加入堿性磷酸酶標(biāo)記的抗雞的(結(jié)合物)至微孔板中,結(jié)合物將與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合,孵育后洗掉未結(jié)合的結(jié)合物,加入底物溶液。底物與堿性磷酸酶發(fā)生反應(yīng)形成黃色的物質(zhì)。后,終止反應(yīng),將顏色固定。顏色的深淺可用酶標(biāo)儀(405-410nm)測(cè)定。
【主要組成成份】
序號(hào) | 名稱 | 規(guī)格(48T/96T) | 序號(hào) | 名稱 | 規(guī)格(48T/96T) |
1 | 包被板 | 12孔×4/8條 | 7 | 終止液(6號(hào)液) | 6ml×1瓶 |
2 | 酶結(jié)合物(1號(hào)液) | 3/6ml×1瓶 | 8 | 陽(yáng)性對(duì)照品 | 0.8ml×1支 |
3 | 濃縮洗滌液(2號(hào)液) | 25/50ml×1瓶 | 9 | 陰性對(duì)照品 | 0.8ml×1支 |
4 | 底物(3號(hào)液) | 6ml×1瓶 | 10 | 不干膠膜 | 1/2片 |
5 | 顯色劑(4號(hào)液) | 6ml×1瓶 | 11 | 自封袋 | 1個(gè) |
6 | 樣本稀釋液(5號(hào)液) | 25/50ml×1瓶 | 12 | 說(shuō)明書 | 1份 |
【儲(chǔ)存條件及有效期】
1.2~8℃避光保存,防止冷凍,有效期為12個(gè)月。
2.包被板開封后2~8℃避光保存,使用期限為15天。
【適用儀器】
含450nm和630nm波長(zhǎng)酶標(biāo)儀;37℃恒溫設(shè)備;可調(diào)微量移液器。
【樣本要求】
1. 為取得實(shí)驗(yàn)效果,避免使用含疊氮鈉、高血脂、長(zhǎng)菌以及嚴(yán)重溶血的樣品;
2.短期(7天)將進(jìn)行檢測(cè)的血清樣品可存放于2~8℃;如需長(zhǎng)期保存,應(yīng)置于-20℃或以下,避免反復(fù)凍融。
【檢驗(yàn)方法】
旋毛蟲抗體快速檢測(cè)條 |
豬旋毛蟲抗原檢測(cè)試劑條 |
豬乙型腦炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒 |
豬弓形蟲抗體金標(biāo)檢測(cè)卡 |
豬口蹄疫間接血凝檢測(cè)試劑 |
1. 洗滌液配制:用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液(2號(hào)液)按1:10稀釋(如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水),充分混勻即為工作洗滌液。
2.樣本稀釋:用樣本稀釋液(5號(hào)液)將待檢血清按1:100稀釋(如5μl血清+495μl樣本稀釋液),充分混勻。 陰性、陽(yáng)性對(duì)照品不用稀釋,直接加樣。
3.加樣反應(yīng):每次試驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性及空白對(duì)照各1孔(分別加入陰性、陽(yáng)性對(duì)照及樣本稀釋液100μl)。樣本檢測(cè)孔每孔加已稀釋血清樣本100μl。37℃避光反應(yīng)30分鐘。甩去孔內(nèi)液體,每孔注滿工作濃度洗滌液洗滌3次,每次均需停留1分鐘;后一次甩凈,拍干。
4.加酶反應(yīng):除空白對(duì)照孔外,其余每孔加酶結(jié)合物(1號(hào)液)1滴,37℃避光反應(yīng)30分鐘。甩去孔內(nèi)液體,如上洗滌,拍干。
5.顯色反應(yīng):加底物(3號(hào)液)和顯色劑(4號(hào)液)各1滴,混勻,37℃下避光顯色10分鐘。
6.終止反應(yīng): 加終止液(6號(hào)液)1滴,以空白對(duì)照調(diào)零,用酶標(biāo)儀于450nm波長(zhǎng)(630nm作為參比波長(zhǎng))讀取OD值。
【參考值】
1.Cut-off 值 (COV)=陰性對(duì)照平均OD值×2.1 (陰性對(duì)照孔OD值<0.08時(shí)按0.08計(jì))。
2.有效性判定:
空白對(duì)照孔OD值<0.05(若大于0.05則實(shí)驗(yàn)無(wú)效);
陰性對(duì)照孔OD值≤0.10(若大于0.10則實(shí)驗(yàn)無(wú)效);
陽(yáng)性對(duì)照孔OD值≥0.30(若小于0.30則實(shí)驗(yàn)無(wú)效)。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
樣本OD值≥COV值時(shí),判為病毒抗體陽(yáng)性;
樣本OD值<COV值時(shí),判為病毒抗體陰性。
【檢驗(yàn)方法的局限性】本試劑僅適用于檢測(cè)鴨血清。
【禽呼腸孤抗體檢測(cè)-elisa酶聯(lián)免疫試劑盒注意事項(xiàng)】
1.包被板須密封防潮。從冷藏環(huán)境中取出時(shí),應(yīng)平衡至室溫后,方可開封啟用。未使用完的板條應(yīng)即時(shí)放回有干燥劑的自封袋中,4℃密封保存。
2.滴加試劑前應(yīng)將滴瓶輕搖、混勻,首滴棄去;滴加試劑時(shí)瓶身應(yīng)保持豎直。
3.瓶蓋每次使用后要蓋緊,各瓶蓋之間不可混用。不同批號(hào)試劑盒的試劑組份不可混用。
4.孵育時(shí),推薦使用水浴箱。如無(wú)水浴箱,可取密封濕盒放入37℃溫箱內(nèi)使用。
5.用棄的試劑盒及樣本都應(yīng)按污染物妥善處理。試劑盒內(nèi)終止液有腐蝕性,須小心使用。