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甲型流感病毒(IAV)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)新品

發(fā)布日期: 2023-03-29
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甲型流感病毒(IAV)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)新品

【產(chǎn)品名稱】

商品名稱:甲型流感病毒(IAV)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)新品

Name :Avian Influenza Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】50T/盒

【預(yù)期用途】

甲型流感是由甲型流感病毒(AIV)引起的一種禽類傳染病,雞、火雞、鴨和鵪鶉等家禽均可感染,發(fā)病情況

差別較大,有的出現(xiàn)急性死亡,有的無癥狀帶毒。水禽是 AIV 的自然宿主,也是流感病毒的天然基因庫,幾乎

所有亞型的流感病毒都可以在水禽中分離到[1]。在世界范圍內(nèi),家禽中流行的主要有 H5、H6、H7、H9 等亞型。

H5 和 H7 亞型的某些毒株可以造成禽類很高的發(fā)病率和死亡率,被稱為高致病性甲型流感(HPAI)病毒。OIE 將

高致病性甲型流感列為 A 類動物疫病,我國也將其列為一類動物疫病[2-3]。

本試劑盒利用實(shí)時熒光 PCR 原理,檢測甲型流感病毒,對甲型流感診斷有重要指導(dǎo)意義。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒針對甲型流感病毒 M 基因高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針,在反應(yīng)體系中含甲型流感病毒基

因組模板的情況下,PCR 反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號。利用儀器對 PCR 過程中相應(yīng)通道的信號強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時

監(jiān)測和輸出,實(shí)現(xiàn)檢測結(jié)果的定性、定量分析。

【試劑組成】

111111.png

注:1)不同批號試劑不能混用。

2)試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標(biāo)示的檢測次數(shù)。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過5 次,有效期12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量PCR 檢測儀。

【標(biāo)本采集】

病死或撲殺動物,取喉氣管、腦、胸肌、心肌和肺等組織;待檢活動物,用棉拭子取呼吸道分泌物或排泄

物,置于 1mL 50%甘油生理鹽水中。

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,

嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1 樣本前處理

每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g,手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生

理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,8000rpm 離心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離

心管中;棉拭子直接取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2 核酸提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進(jìn)行核酸提

取,請按照試劑說明書進(jìn)行操作。

2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的PCR 反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照;反應(yīng)管數(shù)

每滿10 份,多配制1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:

22222.png

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到PCR 反應(yīng)管中,21uL/管。

3. 加樣(樣本處理區(qū))

將步驟1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,

短暫離心。

4. PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為25μL;熒光通道選擇:

檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列儀器請勿選擇ROX 參比熒光,

選擇None 即可。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:

3333.png

5. 結(jié)果分析判定

5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置Baseline 和Threshold:一般直接按機(jī)器自動分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像

調(diào)節(jié)Baseline 的start 值(一般可在3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及Threshold 的

Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。

5.2 結(jié)果判斷

陽性:檢測通道Ct 值≤35,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線;

可疑:檢測通道35<Ct 值≤38,建議重復(fù)檢測,如果檢測通道仍為35<Ct 值≤38,且曲線有明顯的增長曲線,

判定為陽性,否則為陰性;

陰性:樣本檢測結(jié)果Ct 值>38 或無Ct 值。

6. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品:Ct>38 或無Ct 值顯示;

陽性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期,且Ct 值≤32;以上條件應(yīng)同時滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

7.檢測方法的局限性

1.樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

3.陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會導(dǎo)致假陽性結(jié)果;

4.病原體在流行過程中基因突變、重組,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

5.不同的提取方法存在提取效率差異,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

6.試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果;

7.本檢測結(jié)果僅供參考,如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

【注意事項(xiàng)】

1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行;

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,混勻并短暫離心;

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;

7.實(shí)驗(yàn)完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

【參考文獻(xiàn)】

[1] Webster R G, Bean W J, Gorman O T, et al. Evolution and ecology of influenza A viruses [J]. Microbiological

Reviews, 1992, 56(1): 152-179.

[2] Shortridge K. Avian influenza A viruses of southern China and Hong Kong: ecological aspects and implications for

man [J]. Bulletin of the World Health Organization, 1982, 60(1): 129.

[3] 張燁, 舒躍龍. 2004–2012 年我國甲型流感流行情況 [J]. 中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志, 2013, 27(3): 239-240.【生

產(chǎn)企業(yè)】

企業(yè)名稱:上海晅科生物科技有限公司


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