耐熱DNA聚合酶
由于PCR的第一步需要在高溫(90℃)下分離DNA鏈,因此所有PCR反應(yīng)都需要能夠在高溫(約70°℃)下發(fā)揮作用的DNA聚合酶。
一種常見的PCR DNA聚合酶稱為Taq聚合酶,從嗜熱細(xì)菌水生棲熱菌中獲得,是一種熱穩(wěn)定性酶。
寡核苷酸引物
引物是短鏈核苷酸(DNA或RNA)與模板 DNA 互補(bǔ),并充當(dāng) DNA/RNA聚合酶開始合成新 DNA的起點。引物是與模板DNA互補(bǔ)的短核苷酸鏈(DNA或RNA),充當(dāng) DNA/RNA聚合酶DNA合成的起點。它們對于 DNA合成的開始是必需的。與在退火過程完成后產(chǎn)生氫鍵的變性相比,引物與單鏈DNA 退火所需的溫度(50-65°C)較低。
脫氧核糖核苷酸三磷酸(dNTP)
DNA聚合酶需要dNTP才能合成 DNA。
緩沖系統(tǒng)
得益于 PCR 緩沖液,PCR 反應(yīng)始終保持最佳條件。
PCR緩沖液中的主要成分為Tris-HCI、氯-化-鉀(KCI)和氯化鎂(MgCl 2)。
為了在PCR過程中保持pH穩(wěn)定,使用tris-HCI和KCI.為了確保 DNA聚合酶在 PCR 過程中正確進(jìn)行 DNA合成,鎂離子充當(dāng)酶的輔助因子。