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熒光PCR試劑盒的檢測方法常見的局限性主要包括哪幾部分

更新日期: 2022-10-26
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DNA提取:對(duì)上述處理好的標(biāo)本加入等體積核酸提取液(固體標(biāo)本加入50μL核酸提取液),100℃恒溫處理10min,13,000rpm離心5min,取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5mL EP管,-20℃保存。
檢測方法的局限性:
a.樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);
b.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果;
c.陽性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果;
d.病原體在流行過程中基因突變、重組,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
e.不同的提取方法存在提取效率差異,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
f.試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果;
g.本檢測結(jié)果僅供參考,如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。
結(jié)果判斷:
陽性:檢測通道Ct值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。
可疑:檢測通道Ct值>35.0,且出現(xiàn)典型擴(kuò)增曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn),重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)Ct值≤35.0和典型擴(kuò)增曲線者為陽性,否則為陰性。
陰性:樣本檢測結(jié)果無Ct值且無明顯的擴(kuò)增曲線。
質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):
陰性質(zhì)控品:無明顯擴(kuò)增曲線或無Ct值顯示;
陽性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期,且Ct值≤32;以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無效。
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