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原代細(xì)胞的培養(yǎng)質(zhì)量至關(guān)重要

更新日期: 2020-12-25
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  原代細(xì)胞的培養(yǎng)是指直接從機(jī)體取下細(xì)胞、組織和器官后立即進(jìn)行培養(yǎng)。因此,較為嚴(yán)格地說(shuō)是指成功傳代之前的培養(yǎng),此時(shí)的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì),如果是正常細(xì)胞,仍然保留二倍體數(shù)。但實(shí)際上,通常把一代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng),是細(xì)胞培養(yǎng)中很重要的,其質(zhì)量決定著傳代細(xì)胞的質(zhì)量,因此它的培養(yǎng)的質(zhì)量至關(guān)重要。
 
  原代細(xì)胞是非常敏感的細(xì)胞,需要傳統(tǒng)培養(yǎng)基之外的額外營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。為了優(yōu)化存活和生長(zhǎng),需要針對(duì)每種細(xì)胞類型選擇特定的培養(yǎng)基。例如,內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需求與上皮細(xì)胞或神經(jīng)元有很大區(qū)別,因此需要特制的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基。而傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)基依靠血清提供生長(zhǎng)因子、激素、脂質(zhì)和其他的未知組分,以支持細(xì)胞的生長(zhǎng)。但對(duì)于原代細(xì)胞,高血清水平可導(dǎo)致細(xì)胞分化,或促進(jìn)污染細(xì)胞如成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)。
 
  此外,添加血清也受到成本上升及不同批次間差異性的困擾。配制具有很少或沒(méi)有血清的特殊培養(yǎng)基則可以避免這些問(wèn)題,并且更加有利于促進(jìn)特定類型細(xì)胞的生長(zhǎng)。此外,其他一些實(shí)踐,例如在更多的生理學(xué)相關(guān)底物上接種原代細(xì)胞而不是使用合成聚合物,可以顯著的促進(jìn)細(xì)胞貼壁、增殖及保持純度。
 
  實(shí)驗(yàn)步驟:
 
  1.試劑耗材準(zhǔn)備;
 
  2.取新鮮動(dòng)物組織;
 
  3.酶消化;
 
  4.過(guò)濾網(wǎng)篩選、分離細(xì)胞;
 
  5.加培養(yǎng)液,37℃、5%CO2培養(yǎng);
 
  6.傳代;
 
  7.凍存;
 
  8.復(fù)蘇。
 
  應(yīng)用:
 
  1.為研究生物體細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝、繁殖提供有力的手段;
 
  2.為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件;
 
  3.服務(wù)于臨床實(shí)踐,用于藥物篩選等。
 
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