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原代培養(yǎng)對于建成細胞系是至關(guān)重要

更新日期: 2019-08-27
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  細胞系指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。(由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系),因此,細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞(特定環(huán)境下口語和書面語都使用),廣義是指可傳代的細胞。經(jīng)過40-50次分裂的渡過第二次死亡危機的細胞,稱之為細胞系。如細胞系的生存期有限,則稱之為有限細胞系;已獲無限繁殖能力的細胞系,稱連續(xù)或無限細胞系。無限細胞系大多已發(fā)生異倍化,具異倍體核型,可能成為惡性細胞,因此本質(zhì)上已是發(fā)生轉(zhuǎn)化的細胞系。無限細胞系有永生性(不死性),但仍保留接觸抑制和無異體接種致死;有的有永生性,異體接種有致瘤性,說明已惡性化。由某一細胞系分離出來的、在性狀上與原細胞系不同的細胞系,稱亞系。
  
  原組織中含有多種類型的異質(zhì)性細胞,經(jīng)過培養(yǎng)條件選擇,細胞已趨于均一,這些細胞群體可在體外繼續(xù)增殖和成為某一種種系的細胞群體。因此,原代培養(yǎng)是否成功對于建成細胞系是至關(guān)重要的階段。原代培養(yǎng)成功的關(guān)鍵與以下因素有關(guān):
  
  一、選擇合適的原代培養(yǎng)方法
  
  組織塊、酶消化和機械分離三種方法,各有優(yōu)缺點。酶消化法可以獲得大量的活細胞.直接培養(yǎng)細胞形成單層,建立細胞系較快速,成功率較高。胰蛋白酶是常用的方法,用于分離組織和常規(guī)傳代,但胰蛋白酶可能損傷細胞。膠原酶對細胞間質(zhì)有很好的作用,因此對消化含膠原組織豐富的正常上皮組織和癌組織效果好,對上皮細胞損傷小。組織塊法取材組織量小,當不能用其他方法時可用。機械分離方法可快速獲取細胞,但間質(zhì)細胞多,對細胞損傷大,因此,根據(jù)組織來源和培養(yǎng)目的選擇方法。
  
  二、選擇合適的培養(yǎng)條件
  
  原代培養(yǎng)的組織含有多種類型的細胞,要促進所需要的細胞增殖,抑制混雜細胞生長,可按照細胞營養(yǎng)要求,選擇合適的培養(yǎng)基。如果要建立上皮細胞系,由于纖維細胞在體外比上皮細胞更易于生長,因此,限制培養(yǎng)基中血清濃度和加人可刺激上皮細胞生長的必要成分,可以促進上皮細胞生長,抑制纖維細胞生長。
  
  三、精心呵護細胞,適時傳代和換液
  
  傳代時,酶消化細胞要適時,及時換液保持培養(yǎng)液恒定的pH值。避免由于污染或培養(yǎng)中不慎事故,使細胞毀于一旦。要及時從低代的細胞開始凍存,適時復(fù)蘇細胞,防止傳代細胞中斷。
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