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ELISA檢測試劑盒試驗有必要恪守哪3個中心原理

更新日期: 2019-04-04
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   ELISA檢測試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。
 
  ELISA檢測試劑盒可以用于:(1)檢測大分子抗原和特異性抗體等;(2)具有快速、靈敏、簡便、載體易于標準化等優(yōu)點。
 
  ELISA檢測試劑盒實驗中的血清需采用血管收集血液,室溫血液自然凝固30分鐘,1000xg離心15分鐘左右,收集上清,分裝后,標好號,-20°C或-80°C保存。運輸是用干冰。
 
  把ELISA檢測試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。對于一個旨在分離CD4陽性T的試劑盒來說,操作流程主要有以下幾步。首先,將樣品與anti-CD4抗體包被的磁珠共同孵育,使抗體與CD4+T結(jié)合。然后洗去不需要的非目標(即不表達CD4的),留下磁珠-抗體-復合物。將上述復合物與能結(jié)合anti-CD4抗體的二抗一起孵育胞,形成磁珠-抗體-二抗復合物。我們可以用磁鐵去除這種磁珠-抗體-二抗復合物,而所有的CD4+細胞留在上清中。zui后,只需將上清轉(zhuǎn)移就可以進行下游研究了。
 
  ELISA檢測試劑盒試驗有必要恪守以下3個中心原理:
 
  (1)抗原或抗體能吸附于固相載體表面,并堅持其免疫學活性;
 
  (2)抗原或抗體可通過共價鍵與酶銜接構(gòu)成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能堅持其免疫學和酶學活性;
 
  (3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可依據(jù)參加底物的色彩反響來斷定是否有免疫反響的存在,并且色彩反響的深淺是與標本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,ELISA檢測試劑盒可依據(jù)已知濃度的抗原或抗體的色彩反響的深淺制作規(guī)范曲線并依此計算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。
 
  ELISA檢測試劑盒免費代測注意事項
 
  1.從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
 
  2.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差
 
  3.建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。
 
  4.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
 
  5.為避免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
 
  6.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

       7.底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
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