脊髓灰質(zhì)炎病毒2型(PV-2)熒光PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

【產(chǎn)品名稱】

商品名稱：脊髓灰質(zhì)炎病毒 2 型（PV-2）核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR 熒光探針?lè)?

Name ：Diagnostic Kit for Human Poliovirus type 2 RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)

【包裝規(guī)格】48份/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測(cè)的咽拭子標(biāo)本等標(biāo)本中脊髓灰質(zhì)炎病毒 2 型 RNA，適用于

脊髓灰質(zhì)炎病毒 2 型感染的輔助診斷。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒用一對(duì)脊髓灰質(zhì)炎病毒2型特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，

用一步法熒光RT-PCR技術(shù)對(duì)脊髓灰質(zhì)炎病毒2型RNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于

臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

說(shuō)明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 5 次，

有效期 12 個(gè)月。

【標(biāo)本采集】

采集病人的咽拭子標(biāo)本，應(yīng)使用采樣拭子，適度拭抹咽后壁和兩側(cè)扁桃體部

位，應(yīng)避免觸及舌部；迅速將拭子放入標(biāo)本采集管中，旋緊管蓋并密封，以防干燥。

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過(guò) 6 個(gè)月，標(biāo)

本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

取 100uL 棉拭子標(biāo)本于 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2RNA 提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒（離心柱提取

法），請(qǐng)按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性

對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 RNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl，分別加入相應(yīng)的反

應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

5.2結(jié)果判斷

陽(yáng)性：檢測(cè)通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線；

可疑：檢測(cè)通道 35.0<Ct 值≤37，建議重復(fù)檢測(cè)，如果檢測(cè)通道仍為 35.0<Ct

值≤37，且曲線有明顯的增長(zhǎng)曲線，判定為陽(yáng)性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>37 或無(wú) Ct 值。

7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無(wú)明顯擴(kuò)增曲線或無(wú) Ct 值顯示；

陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期，且 Ct 值≤32；

以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)

陰陽(yáng)性參考品符合率：5 份陽(yáng)性參考品符合率為 100％；10 份陰性參考品符合率

為 100％。

低檢測(cè)限：5.0×102copies/ml。

精密度：批內(nèi)、批間精密度檢測(cè) Ct 值的變異系數(shù)（CV）均小于等于 3%。

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